原料乳中三聚氰胺快速檢測液相色譜法
1?范圍
本標準規(guī)定了液相色譜法快速檢測原料乳中三聚氰胺的方法。
本標準適用于原料乳，也適用于不含添加物的液態(tài)乳制品。
本標準定量檢測范圍為0.30mg/kg～100.0mg/kg，方法檢測限為0.05mg/kg。
注：當原料乳中三聚氰胺的含量大于100.0mg/kg時，具體操作方法見6.2.2.3.2。
2?規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的
修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究
是否可使用這些文件的zui新版本。凡是不注日期的引用文件，其zui新版本適用于本標準
GB/T6379.1?測量方法與結果的準確度（正確度與精密度）?第1部分：總則與定義
GB/T6379.2?測量方法與結果的準確度（正確度與精密度）?第2部分：確定標準測量方法重復性與
再現(xiàn)性的基本方法
GB/T6682?分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法
3?原理
用乙腈作為原料乳中的蛋白質沉淀劑和三聚氰胺提取劑，強陽離子交換色譜柱分離，高效液相色譜
-紫外檢測器/二極管陣列檢測器檢測，外標法定量。
4?試劑和材料
除另有說明外，所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。
4.1?乙腈（CH3CN）：色譜純。
4.2?磷酸（H3PO4）。
4.3?磷酸二氫鉀（KH2PO4）。
4.4?三聚氰胺標準物質（C3H6N6）：純度大于或等于99%。
3
4.5?三聚氰胺標準貯備溶液：1.00×10 mg/L。
稱取100mg?三聚氰胺標準物質（準確至0.1mg），用水完全溶解后，100 mL?容量瓶中定容至刻度?，
混勻，4℃條件下避光保存，有效期為1個月。
4.6?標準工作溶液：使用時配制。
2
4.6.1?標準溶液A：2.00×10 mg/L。
準確移取20.0 mL?三聚氰胺標準貯備溶液（4.5），置于100mL?容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻?。
4.6.2?標準溶液B：0.50mg/L。
準確移取0.25mL?標準溶液A（4.6.1），置于100mL?容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。
4.6.3?按表1?分別移取不同體積的標準溶液A（4.6.1）于容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。按表2
分別移取不同體積的標準溶液B（4.6.2）于容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。
?
?
4.7?磷酸鹽緩沖液：0.05 mol/L。
稱取6.8g磷酸二氫鉀（4.3）（準確至0.01g），加水800mL完全溶解后，用磷酸（4.2）調節(jié)pH至3.0，
用水稀釋至1L，用濾膜（4.9）過濾后備用。
4.8?一次性注射器：2 mL。
4.9?濾膜：水相，0.45μm。
4.10?針式過濾器：有機相，0.45μm。
4.11?具塞刻度試管：50mL。
5?儀器
5.1?液相色譜儀：配有紫外檢測器/二極管陣列檢測器。
5.2?分析天平：感量0.0001g和0.01g。
5.3 pH計：測量精度±0.02。
5.4?溶劑過濾器。
6?測定步驟
6.1?試樣的制備
稱取混合均勻的15 g原料乳樣品（準確至0.01g），置于50mL具塞刻度試管（4.11）中，加入30mL
乙腈（4.1），劇烈振蕩6 min，加水定容至滿刻度，充分混勻后靜置3 min，用一次性注射器（4.8）吸
取上清液用針式過濾器（4.10）過濾后，作為高效液相色譜分析用試樣。
6.2?高效液相色譜測定
6.2.1?色譜條件
a)?色譜柱：強陽離子交換色譜柱，SCX，250 mm×?4.6mm（i.d.），5?μm，或性能相當者。
注：?宜在色譜柱前加保護柱（或預柱），以延長色譜柱使用壽命。
b)?流動相：磷酸鹽緩沖溶液（4.7）-?乙腈（70+30，體積比），混勻。
c)?流速：1.5mL/min。
d)?柱溫：室溫。
e)?檢測波長：240nm。
f)?進樣量：20μL。
6.2.2?液相色譜分析測定
6.2.2.1?儀器的準備
開機，用流動相平衡色譜柱，待基線穩(wěn)定后開始進樣。
6.2.2.2?定性分析
依據(jù)保留時間一致性進行定性識別的方法。根據(jù)三聚氰胺標準物質的保留時間，確定樣品中三聚氰
胺的色譜峰（參見附錄A）。必要時應采用其他方法進一步定性確證。
6.2.2.3?定量分析
校準方法為外標法。
6.2.2.3.1?校準曲線制作
根據(jù)檢測需要，使用標準工作溶液（4.6.3）分別進樣，以標準工作溶液濃度為橫坐標，以峰面積為
縱坐標，繪制校準曲線。
6.2.2.3.2?試樣測定
使用試樣（6.1）分別進樣，獲得目標峰面積。根據(jù)校準曲線計算被測試樣中三聚氰胺的含量（mg/kg）。
試樣中待測三聚氰胺的響應值均應在方法線性范圍內。
注：?當試樣中三聚氰胺的響應值超出方法的線性范圍的上限時，可減少稱樣量再進行提取與測定。
6.2.3?結果計算
6.2.3.1?計算公式
結果按式（1）計算：
V 1000
X =c×?×?……………………………（1）
m 1000
式中：
X——原料乳中三聚氰胺的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
c——從校準曲線得到的三聚氰胺溶液的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；
V——試樣定容體積，單位為毫升（mL）；
m——樣品稱量質量，單位為克（g）。
6.2.3.2?計算結果有效數(shù)字
通常情況下計算結果保留3位有效數(shù)字；結果在0.1~1.0mg/kg時，保留2位有效數(shù)字；結果小于0.1
mg/kg時，保留1位有效數(shù)字。
6.3?平行試驗
按以上步驟，對同一樣品進行平行試驗測定。
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