液質(zhì)聯(lián)用法測定奶粉中三聚氰胺總結(jié)

2020.3.15

07年發(fā)生的寵物飼料三聚氰胺事件時，我也注意到了，但因為想到飼料跟我們系統(tǒng)不可能有關(guān)系，也就沒去管它。奶粉事件嚴格來說，是質(zhì)檢部門的事，與我們系統(tǒng)并沒有關(guān)系，但我們這個系統(tǒng)和國內(nèi)大部分部門沒什么差別—好表現(xiàn)，有露面的機會領(lǐng)導是不會錯過的，因此在奶粉事件經(jīng)媒體曝光第二天，領(lǐng)導的命令就來了，并順便送來了5罐不同批號的三鹿奶粉。而這個任務也就毫無懸念地落到了作為負責液質(zhì)聯(lián)用儀和新項目開發(fā)的我的頭上。接到命令的時候我還在外面開會，而且對三聚氰胺的性質(zhì)檢測方法一無所知。但命令來了，就得立馬往回趕，同時馬上電話聯(lián)系借標準(買是來不及了)多虧了07年的飼料事件，很順利地從本地出入境部門借到標準，馬上派學生去拿。我回到單位時，標準已經(jīng)拿回來，馬上上網(wǎng)查資料、配標準、摸質(zhì)譜條件、樣品處理。在中秋假的前一天，從下午4點開始到晚上10點測完樣品，總算沒犧牲我的中秋假期。中秋假后再回來將方法優(yōu)化好，當然檢測的樣品粗算一下也超過了700份，幸虧當時我手下帶了兩個學生，樣品前處理就交給了他們，真是辛苦他們了!

下面主要說說我用液質(zhì)聯(lián)用法測定的體會，HPLC法和GC-MS法沒試過，不敢在此胡說。個人體會，有不對的地方，歡迎大家指正。

從開始參考的是國內(nèi)某期刊測飼料的方法到最后用FDA方法(08年10月8日頒布)，中間試過很多樣品處理方法，具體如下：

1、用1%三氯乙酸或乙腈水(50+50)提取，MCX小柱凈化，行不通，部分樣品蛋白質(zhì)沉淀不下來，甚至同一樣品，也有的能產(chǎn)生沉淀，有的沉不了。部分樣品渾濁，固相萃取根本沒法進行，液體在小柱上濾不動。

2、用0.1%三氯乙酸提取后直接進樣，因為樣品臟，加大稀釋倍數(shù)，峰形不太好，但可以定量。同時發(fā)現(xiàn)隨著三氯乙酸濃度增大，峰形變壞越嚴重。而且因樣品未經(jīng)任何凈化手段，離子源用不了多久就很臟了。

3、用0.1%三氯乙酸提取，乙酸鋅沉淀蛋白后直接進樣，峰形不錯，但回收率不穩(wěn)定。

3、用5%三氯乙酸提取，MCX小柱凈化，樣品干凈，峰形好，但所有樣品包括空白奶粉樣品也有三聚氰胺峰的出現(xiàn)，換了幾個品牌的小柱都一樣，計算下來，有零點幾ppm，雖然結(jié)果不高，但感覺肯定不好。曾與某品牌耗材的技術(shù)工程師討論過這個問題，他解釋是自然界三聚氰胺污染普遍，加上液質(zhì)檢測靈敏度高，造成的這種情況。但事實證明這只是他的臆測，我沒過柱的樣品空白為什么沒有峰呢?

4、FDA方法：0.3%甲酸提取后，取100ml加900ml乙腈，混合后出現(xiàn)蛋白質(zhì)的沉淀，離心過濾后測定，結(jié)果好，峰形好，結(jié)果穩(wěn)定。有人以為樣品沒經(jīng)固相萃取凈化肯定會很臟，但實際應用時沒有出現(xiàn)這種情況，做N多份樣品后，離子源還很干凈。這個是我個人覺得最滿意的方法，檢驗檢疫科學院組織的三聚氰胺考核用的就是這個方法，后面的雞蛋三聚氰胺事件也是用的這個方法。采用工作曲線，根本不用考慮回收率的問題，這個方法最大的好處是可以同時測定三聚氰酸和氰尿酰胺。

總結(jié)：剛開始接觸時，以為三聚氰胺是個很簡單的項目，質(zhì)譜條件很容易做，單一項目也不擔心液相色譜分離的問題，雖然在C18柱上保留差，但改用HILIC柱就一點問題也沒有。一做才發(fā)現(xiàn)并非如此，三聚氰胺是我到目前為止所遇到項目中基質(zhì)效應最嚴重的項目，標準曲線必須用空白樣品加標的工作曲線，常用的固相萃取凈化方法會帶來干擾，三聚氰胺在日常生活接觸不少，我們用的很多塑料制品就是三聚氰胺塑料，這些都可能會帶來污染;看不少文獻提到檢測結(jié)果有假陽性、假陰性的問題，本人在摸索方法時也有遇見，不過改用FDA方法后，尚未發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)這種情況。

下面附上本人實際檢測的MRM質(zhì)譜圖。

0.1%三氯乙酸提取后直接進樣，waters Atlantis C18柱，主峰后面有個小峰，但不影響測定。