三聚氰胺的檢測(cè)方法
三聚氰胺檢測(cè)方法匯總
GC-MS法測(cè)定動(dòng)物食品中的三聚氰胺
Spectra-Quad實(shí)現(xiàn)三聚氰胺含量在線(xiàn)檢測(cè)
超高效液相色譜_電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中殘留的三聚氰胺
反相高效液相色譜法測(cè)定飼料中三聚氰胺的含量
高效液相色譜-二極管陣列法測(cè)定高蛋白食品中的三聚氰胺
高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定飼料中三聚氰胺的含量
高效液相色譜-四極桿質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定飼料中三聚氰胺含量
固相萃取與高效液相色譜聯(lián)用測(cè)定寵物食品中三聚氰胺
液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MSMS）分析寵物食品中三聚氰胺
液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中三聚氰胺殘留
GC-MS法測(cè)定動(dòng)物食品中的三聚氰胺
2.1儀器與條件
Agilent1100高效液相色譜儀（美國(guó)，Agilent公司）；二極管陣列檢測(cè)器（DAD），檢測(cè)波長(zhǎng)240nm，柱溫：40℃。
（1）AgelaVenusilTMASBC18（4.6×250mm）；緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉；流動(dòng)相：緩沖溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min。
（2）AgelaVenusilTMASBC8（4.6×250mm）；流動(dòng)相：緩沖液：乙腈=85：15；緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調(diào)pH為3.0；流速：1.0mL/min；
離子交換固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾杰爾科技有限公司)
2.2試劑與樣品
寵物飼料樣品（農(nóng)業(yè)部飼料供應(yīng)中心提供）；甲醇、乙腈為北京艾杰爾科技有限公司提供；氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購(gòu)于北京化學(xué)試劑公司；三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉（Sigma公司）；甲醇為色譜純，其他均為化學(xué)純。
3實(shí)驗(yàn)方法
3.1樣品前處理方法
(1)標(biāo)準(zhǔn)樣品配制：
取50mg三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用時(shí)，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。
(2)提?。?br>
稱(chēng)取飼料樣品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL2%乙酸鉛溶液，超聲20min。然后取部分溶液轉(zhuǎn)移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過(guò)混合型陽(yáng)離子交換小柱(PCX)。
(3)凈化(PCX小柱，60mg/3mL)：
a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
b)上樣：加入提取液3mL
c)淋洗：3mL水；3mL甲醇；棄去淋洗液并將小柱抽干。
d)洗脫：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。
e)濃縮：50℃，氮?dú)獯蹈桑?0%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生后GC/MS分析。
3.2HPLC檢測(cè)方法
3.2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測(cè)方法
三聚氰胺是強(qiáng)極性化合物，在傳統(tǒng)的反相C18柱上保留很差，需要用離子對(duì)試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）的三聚氰胺檢測(cè)方法和中國(guó)農(nóng)業(yè)部公布的三聚氰胺檢測(cè)方法，采用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，可以得到良好的分離效果，分析色譜圖如下：
圖2VenusilASB色譜柱分離三聚氰胺的譜圖
(a)色譜柱：VenusilASBC84.6×250mm；標(biāo)準(zhǔn)：FDA方法；流動(dòng)相：緩沖液：乙腈=85：15；緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調(diào)pH為3.0；流速：1.0mL/min；柱溫：40oC；波長(zhǎng)：240nm
(b)色譜柱：VenusilASB-C184.6×250mm；標(biāo)準(zhǔn)：中國(guó)農(nóng)業(yè)部頒標(biāo)準(zhǔn)方法；緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉；流動(dòng)相：緩沖溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min;柱溫：40℃；波長(zhǎng)：240nm
空白加水平（mg/L）回收率0.01116%0.1108%0.592%296%
3.2.2三聚氰胺LC-MS檢測(cè)方法
由于FDA公布的HPLC-UV方法中，流動(dòng)相添加了離子對(duì)試劑，因此限制了液質(zhì)聯(lián)用方法的使用；但不用離子對(duì)試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統(tǒng)的C18柱上保留很差，不能得到較好的分離定量〔3〕。
基于此問(wèn)題，艾杰爾科技公司自主開(kāi)發(fā)了新的方法，采用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，不用離子對(duì)試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動(dòng)相不含離子對(duì)試劑，可以用于質(zhì)譜檢測(cè)。
與FDA2007年4月公布的《UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)》相比較，該方法大大降低了最低檢測(cè)限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm），提高了檢測(cè)靈敏度。
以該方法分別在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到的譜圖如下：
圖3LC-MS方法檢測(cè)三聚氰胺的譜圖
緩沖液：10mM的NH4AC；
流動(dòng)相：Buffer:：ACN=95：5；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進(jìn)10uL；柱溫：40℃；波長(zhǎng)：240nm
4結(jié)果與討論
4.1陽(yáng)離子交換柱(PCX)
三聚氰胺呈弱堿性(弱陽(yáng)離子化合物)，凈化過(guò)程一般應(yīng)選擇陽(yáng)離子交換柱。混合型的陽(yáng)離子交換柱(PCX)通過(guò)將磺酸基團(tuán)(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附劑上，具有陽(yáng)離子交換和反相吸附兩種機(jī)理，并具有以下優(yōu)點(diǎn)：
a)可通過(guò)兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機(jī)溶劑)，使樣品更干凈，提高檢測(cè)的靈敏度。
b)批次重復(fù)性好。
c)回收率高，重現(xiàn)性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。
4.2LC-MS方法優(yōu)點(diǎn)：
（1）檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)便：無(wú)須添加離子對(duì)試劑，三聚氰胺就可得到良好的保留與分離，避免了配制離子對(duì)流動(dòng)相的復(fù)雜過(guò)程。
（2）提高了檢測(cè)的靈敏度：無(wú)離子對(duì)試劑，可以用于質(zhì)譜檢測(cè)器，大大降低了最低檢測(cè)限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm）。
（3）降低了檢測(cè)成本：不用離子對(duì)試劑，就不再需要買(mǎi)價(jià)格較貴的離子對(duì)試劑了，從而降低了檢測(cè)成本。
（4）延長(zhǎng)了色譜柱的使用壽命：避免了使用離子對(duì)試劑減少色譜柱壽命的影響。
（5）該方法所使用的色譜柱具有通用性：無(wú)論是用FDA方法、中國(guó)農(nóng)業(yè)部部頒標(biāo)準(zhǔn)方法和本公司開(kāi)發(fā)的LC-MS方法，使用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱均能得到一個(gè)很好的檢測(cè)結(jié)果，從而給客戶(hù)提供了多種選擇空間。
國(guó)家食品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)中心有關(guān)人士說(shuō)，在現(xiàn)有的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)奶粉檢測(cè)中，主要進(jìn)行蛋白質(zhì)、脂肪、細(xì)菌等檢測(cè)。三聚氰胺屬于化工原料，是不允許添加到食品中的，所以現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)不會(huì)包含相應(yīng)內(nèi)容。也就是說(shuō)，三聚氰胺不屬于常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，正常情況下，很少有人會(huì)想到去檢測(cè)它。
