等電點(diǎn)是一個(gè)分子表面不帶電荷時(shí)的pH值。蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，其等電點(diǎn)和它所含的酸性氨基酸和堿性氨基酸的數(shù)量比例有關(guān)。當(dāng)溶液在某一特定pH值的條件下，蛋白質(zhì)所帶正電荷與負(fù)電荷恰好相等(總凈電荷為零)時(shí)，在電場(chǎng)中既不向陽(yáng)極移動(dòng)，也不向陰極移動(dòng)。

隨著現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)的發(fā)展，出現(xiàn)了大量的蛋白質(zhì)和多肽類藥物分子，等電點(diǎn)是其重要的理化參數(shù)，對(duì)這些蛋白質(zhì)多肽類藥物分子等電點(diǎn)的分析已成為醫(yī)藥工業(yè)質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)。例如：在復(fù)合抗體藥物的質(zhì)量控制中，各單克隆抗體組分的含量是保證產(chǎn)品的藥效、安全性和批間重復(fù)性的重要指標(biāo)。由于各單克隆抗體通常具有較高比例的同源序列，其分子量、分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)非常接近，常用的多數(shù)分析方法如體積排阻色譜、毛細(xì)管凝膠電泳等方法均無(wú)法區(qū)分這些不同的單克隆抗體組分，因而不適用于復(fù)合抗體藥物的組成和含量分析這一目的。等電點(diǎn)是單克隆抗體的固有性質(zhì)之一，不同的單克隆抗體由于氨基酸組成、序列和空間結(jié)構(gòu)不同，等電點(diǎn)通常具有明顯的差異，因而可以利用不同單克隆抗體的等電點(diǎn)差異對(duì)其進(jìn)行分離和定量。毛細(xì)管等電聚焦 (cIEF) 在毛細(xì)管電泳技術(shù)測(cè)定兩性物質(zhì)等電點(diǎn)的基礎(chǔ)上，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中不同組分的等電點(diǎn)分離和檢測(cè)。

電荷變化是測(cè)定單抗藥物降解變靈敏快速的方法之一，已經(jīng)被國(guó)內(nèi)外生物制藥企業(yè)廣泛采用。

檢測(cè)方法

全柱成像毛細(xì)管等電聚焦電泳（iCIEF）為Proteinsimple創(chuàng)全景式動(dòng)態(tài)等電聚焦分析技術(shù)，已經(jīng)成為等電點(diǎn)檢測(cè)及電荷異質(zhì)性分析的行業(yè)金標(biāo)準(zhǔn)

實(shí)驗(yàn)儀器和材料

Proteinsimple公司Maurice快速全自動(dòng)蛋白質(zhì)表征分析系統(tǒng)

實(shí)驗(yàn)原理

通過(guò)毛細(xì)管等電聚焦電泳，將樣本中蛋白質(zhì)基于等電點(diǎn)不同而分離，280nm的紫外光照射下CCD檢測(cè)器檢測(cè)不同等電點(diǎn)蛋白質(zhì)的光吸收峰，從而得到該樣本中蛋白質(zhì)的特征譜形。

利用iCIEF監(jiān)視貯存過(guò)程中蛋白的電荷異質(zhì)性，作為產(chǎn)品穩(wěn)定性評(píng)估的一部分。結(jié)果顯示，在3個(gè)月的存儲(chǔ)期間（22℃），CRM197的酸性峰（pI 5.77和5.82）增加，而主峰（pI 5.9）降低

樣品要求：蛋白純度>90%；蛋白質(zhì)量>100 μg，濃度0.5μg/μL以上。

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注：該產(chǎn)品未在中華人民共和國(guó)食品藥品監(jiān)督管理部門(mén)申請(qǐng)醫(yī)療器械注冊(cè)和備案，不可用于臨床診斷或治療等相關(guān)用途。